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微量分光光度計在基因克隆里的作用

更新時間:2016-07-22瀏覽:3734次
   微量分光光度計克隆測定奶山羊脂肪酸合酶基因啟動子的全長序列,進行活性區域分析,為奶山羊FAS基因功能和表達調控機理研究提供依據.根據牛和人脂肪酸合酶基因啟動子的同源序列以及西農薩能奶山羊脂肪酸合酶基因5UTR區域,分別設計上、下游引物,以西農薩能奶山羊全血DNA為模板克隆啟動子序列.依據生物信息學分析結果重設引物,將FAS啟動子基因分段克隆并連接到熒光素酶表達載體PGL-3,與Psv-β-半乳糖苷酶對照載體共轉染293、MCF-7細胞,進行熒光素酶活性檢測和β-半乳糖苷酶的活性檢測.FAS基因啟動子序列全長2 640 bp,與牛、人FAS啟動子序列同源性90%以上,包括數個潛在SP1、Ets、LSF等轉錄因子結合位點和CCAAT框、GC框.-1 040-340 bp處可能包含啟動子活性中心,通過啟動子缺失片段試驗將活性中心范圍縮小至-721-540 bp之間.通過克隆FAS基因啟動子區域,分析表明啟動子前端存在負調控元件,找出了啟動子小活性中心。
  基因克隆技術是生命科學技術領域里非常重要的部分,是分子生物學的核心技術,其目的是獲得某一基因或DNA片段的大量拷貝,用于深入分析基因的結構與功能,并可達到人為改造細胞以及物種遺傳性狀的目的。基因克隆術中目的基因的獲得、目的基因和載體的連接、重組分子的擴增和鑒定等關鍵步驟中基礎的是核酸濃度的測定,如果所用核酸濃度或者純度不夠,可能會造成實驗的不理想或失敗,將會浪費大量的人力物力,所以核酸濃度以及純度的檢測是*的。微量分光光度計正是測量核酸濃度以及純度的理想儀器,自帶觸摸屏、渦旋,直接顯示核酸濃度比值,同時有背景消除,顯示核酸的紫外吸收峰圖。
  微量分光光度計是測量核酸和蛋白濃度理想的選擇。
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